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哺乳动物细胞蛋白表达服务公司

作者:   上传日期:2015-11-30  阅读次数:

哺乳动物细胞蛋白表达系统,具备蛋白折叠和翻译后修饰的功能,使其蛋白更接近天然蛋白,从而获得与天然蛋白相同的生物活性。因此使得哺乳动物细胞表达系统在重组蛋白药物,特别是治疗性重组单抗药物的研发和生产中有最为广泛的应用。

美迪西生物医药所提供的哺乳动物蛋白表达系统基于无血清培养体系提供基因表达优化,瞬时表达,稳定表达及抗体生产等多种真核蛋白服务项目。哺乳动物细胞蛋白表达服务详情

美迪西科研人员建立了成熟的哺乳动物蛋白表达系统及纯化服务平台,提供哺乳动物蛋白表达系统的表达与纯化服务。拥有CHO、HEK293、BHK Vero等多种表达系统。

  • 服务项目
    • 贴壁及悬浮培养
    • 瞬转表达筛选
    • 稳定细胞系建

Rabbit IgG expressed in transient transfected 293 cells

Note: the condition medium was run in 10%SDS-PAGE gel and stained with coomassie blue(备注:)


哺乳动物细胞表达系统的优势在于能够指导蛋白质的争取折叠,提供复杂的N型糖基化等多种翻译后加工功能,因而表达产物在分子结构、理化特性和生物学功能方面最接近于天然的高等生物蛋白质分子。




哺乳动物细胞蛋白表达系统的分类

根据目的蛋白表达的时空差异,可将表达系统分为瞬时、稳定和诱导表达系统。
瞬时表达系统是指宿主细胞在导入表达载体后不经选择培养,载体DNA随细胞分裂而逐渐丢失,目的蛋白的表达时限短暂;瞬时表达系统的优点是简洁,实验周期短。大规模的瞬时表达技术是近年来的一个研究热点。已有报道能放大到100L反应器中生产重组蛋白,产量(分泌型蛋白)可达1~10mg/L。不过该方法技术条件要求高,如质粒的纯度、转染的效率等。

稳定表达系统是指载体进入宿主细胞并经选择培养,载体DNA稳定存在于细胞内,目的蛋白的表达持久、稳定。由于需抗性选择甚至加压扩增等步骤,稳定表达相对耗时耗力。
诱导表达系统是指目的基因的转录受外源小分子诱导后才得以开放。早期实验常使用糖皮质激素、重金属离子等诱导体系来调控基因表达,但存在特异性低和毒性高等诸多缺点;


表达系统的选择

哺乳动物细胞表达系统中,重组蛋白的表达水平与许多因素相关,如转录和翻译调控元件、RNA剪接过程、mRNA稳定性、基因在染色体上的整合位点、重组蛋白对细胞的毒性作用以及宿主细胞的遗传特性等。选定表达系统之后,还需考虑表达载体与宿主细胞的合理搭配问题。因此如果需获得一个基因的高表达。最好多试用几种不同的载体及宿主细胞。

哺乳动物细胞蛋白表达服务

哺乳动物细胞蛋白表达系统应用领域

哺乳动物细胞表达系统已成为多种基因工程药物的生产平台。

哺乳动物细胞表达系统在新基因的发现、蛋白质的结构和功能研究中起了极为重要的作用。

一、稳定表达细胞系的筛选

1、构建目的基因的表达载体

2、确定受体细胞

3、确定筛选方法(抗生素的使用浓度)

4、转染后48小时,串带铺板(1:100),加筛选药物

5、3-4d换液一次,直至存活细胞长出岛状细胞株,越2周

6、克隆耐药细胞,检测目基因的存在与表达。


二、哺乳动物细胞表达系统

(1)宿主细胞

(2)表达载体的构建

(3)表达细胞株的基因共圹增和筛选方法

(4)可调控的哺乳动物细胞表达系统


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