免疫细胞与炎性细胞标志物检测服务-美迪西生物医药

在肿瘤免疫、自身免疫性疾病及细胞与基因治疗等领域蓬勃发展的今天，免疫学检测已从单一的终点读数演变为贯穿药物发现全流程的核心决策工具。随着精准医疗和AI药物研发的发展，免疫学检测已深度融入药物发现的全流程，从靶点验证、先导化合物筛选、临床前安全性评价到临床阶段的有效性/安全性监测等。从T细胞激活到NK细胞杀伤，从细胞因子风暴风险评估到受体占用率精准定量——每一个免疫学指标的深度解析，都是决定创新分子能否顺利推进至临床及最终获批上市的关键依据。
美迪西深耕临床前CRO领域二十余年，作为国内领先的一站式生物医药临床前研发服务CRO，服务覆盖药物发现、药学研究、临床前研究全过程，拥有符合NMPA、FDA、OECD GLP标准及AAALAC认证的研究体系。依托这一强大的平台优势，美迪西生物部搭建了免疫与炎症检测平台。

原代免疫细胞检测：还原真实的免疫微环境

原代免疫细胞保留了体内免疫细胞的完整生物学特性与信号传导网络，是评估免疫调节药物活性最贴近生理状态的体外模型。美迪西生物部已建立覆盖T细胞、B细胞、NK细胞、巨噬细胞、树突状细胞等多类免疫细胞的全方位检测体系：
01 T细胞功能深度评价
T细胞激活与增殖：检测T细胞激活标志物（CD69/CD25）的动态变化，以及基于CellTrace Violet染色的增殖追踪，细胞因子的释放等支持不同时间点的精细化分析。经T细胞激活剂刺激后，可对CD4⁺与CD8⁺T细胞亚群分别进行活化标志物（CD69/CD25）的流式分析。
T细胞分化与细胞因子分泌：Naïve CD4⁺ T 细胞采用 CD3/CD28 激活剂进行活化，分别建立 Th1、Th2、Th17、Treg 四种细胞亚群的常规诱导组与药物抑制诱导组。Th1 常规诱导组加入 IL-12、IL-2及抗 IL-4 抗体；Th2 常规诱导组加入 IL-4、IL-2 及抗 IFN-γ 抗体；Th17 常规诱导组加入 TGF-β1、IL-6、IL-21、IL-23、抗 IL-2 抗体、抗 IL-4 抗体与抗 IFN-γ 抗体；Treg常规诱导组加入 TGF-β1、IL-2、抗 IL-4 抗体与抗 IFN-γ 抗体。各亚群对应的药物抑制诱导组，在加入上述相应细胞因子与中和抗体的基础上同步加入受试药物。
信号通路磷酸化蛋白检测：新鲜 PBMC 设置空白对照组与 100 ng/mL 重组人 IL-2（37℃刺激 15 min）处理组。收集细胞后 4℃进行 CD8 表面染色 30 min，洗涤两次；经裂解固定、冰上透膜后染色抗Stat5 (pY694)流式抗体。
02 B细胞功能评价
B细胞的激活、增殖及功能评价是免疫学研究的经典内容，其检测数据为抗体药物和疫苗的早期研发、机制探索及临床转化提供了不可或缺的免疫学依据。
03 NK细胞功能评价
NK细胞分离与细胞毒性：从人PBMC中分离NK细胞，以K562-luc为靶细胞进行NK细胞介导的细胞毒性检测。
ADCC（抗体依赖的细胞介导的细胞毒性）：以Rituximab为模型抗体，Raji-Luc为靶细胞，系统评估候选抗体药物的ADCC活性。ADCC是抗体Fc effector功能的核心评价指标之一，其检测方法需遵循ICH Q2(R2)等指南要求进行方法学验证。
04 巨噬细胞与DC细胞评价
巨噬细胞分化与M1/M2极化：基于THP-1细胞诱导体系，建立体外巨噬细胞分化及M1/M2极化模型，评估药物对体外巨噬细胞极化的调控作用，为模拟肿瘤微环境（TAM）的极化机制提供参考。
人源DC细胞成熟与表型分析：通过流式细胞术对未成熟DC向成熟DC分化过程中的表面分子表达进行系统鉴定。
05 混合淋巴细胞反应（MLR）
通过异体淋巴细胞共培养，评估免疫调节药物对T细胞活化的抑制或增强效果。MLR是免疫抑制剂和免疫激动剂开发中经典的体外评价模型，能够综合反映药物对适应性免疫应答的调控能力。
06 PBMC/全血细胞因子释放试验
❖ 支持单因子及多因子联合检测，涵盖MSD（MESO Sector S600）、Luminex（Bio-Plex 200）、流式CBA、ELISA等多种检测平台；同时支持固相与液相两种检测模式，可灵活匹配不同项目的检测需求。
❖ 细胞因子释放检测在疾病诊断、基础免疫研究及细胞因子治疗监测等方面具有重要价值。该方法不仅可以预测药物可能引起的细胞因子释放综合征（CRS）的潜在风险，还可以确定最低预期的生物效应水平（MABEL），从而为合理的安全起始剂量选择提供数据支撑。
07 评估免疫细胞的杀伤
❖ LDH、Luciferase、CTG、CCK8 均为体外免疫细胞杀伤常用检测手段。LDH 法通过检测靶细胞破裂释放的乳酸脱氢酶反映细胞裂解水平；荧光素酶（Luciferase）基于靶细胞稳定表达荧光素酶，活细胞信号与存活靶细胞数量正相关，灵敏度更高；CTG 与 CCK8 依托活细胞线粒体脱氢酶活性定量活细胞数目。四类方法各有优势，可定量效应细胞对靶细胞的杀伤能力，广泛应用 CAR-T、双特异性抗体、NK 细胞介导的细胞毒实验。用于候选分子药效筛选、效靶比条件摸索与活性对比，为细胞免疫治疗、抗肿瘤免疫药物体外功能评价提供标准化定量数据，支撑机制研究与候选分子推进。
08 ADCP（抗体依赖的细胞介导的吞噬作用）
在体外评估中，常利用Jurkat-FcγRIIa-NFAT-luc报告基因细胞系（通过检测NFAT通路激活后的Luciferase发光），以Rituximab为模型抗体评估ADCP活性。由于FcγRIIa（CD32a）基因存在多态性（如H131/R131等位基因差异），不同等位基因对IgG的亲和力差异会直接影响ADCP的评估结果。
09 受体占用率（RO）分析
❖ 通过流式细胞术（FACS）及相应的结合/竞争实验，精准测定候选抗体药物在靶细胞表面的受体占用率。流式细胞术是测量受体占用率的主要技术手段，能够在异质性细胞群体中精准测定特定细胞亚群上的靶点结合情况。
❖ RO数据对于评估治疗性生物制品的靶点结合、指导剂量选择、监测药效学（PD）指标及确定安全剂量范围具有关键价值。以CVL006（双特异性抗体）与293T-PDL-1的结合竞争实验为例，通过PE标记的CVL006进行FACS分析，可精确计算半数最大受体占用率（RO50）所对应的药物浓度。
10 TNLRP3炎症小体活化检测
❖ 首先通过 LPS 完成第一信号预刺激，上调细胞内 NLRP3、pro-IL-1β 表达；再以尼日利亚菌素作为第二信号激活 NLRP3 炎症小体，促使成熟 IL-1β 释放。受试化合物与细胞共孵育，若能够抑制炎症小体激活，则上清中 IL-1β分泌水平呈浓度依赖性下降，可通过 ELISA 定量检测IL-1β 评估化合物抑制活性。
❖ 该模型更贴近人体原生免疫细胞生理特征，主要用于筛选与评价 NLRP3 小分子抑制剂，为炎症相关疾病药物的体外药效评价提供功能性数据支撑。

细胞系检测模型：高通量、高重现性的高效筛选工具

除原代细胞体系外，美迪西同步建立了基于工程细胞系的高通量检测平台，适用于早期大规模筛选与机制验证：
❖ THP-1、RAW264.7 细胞因子释放检测：快速评估候选化合物对巨噬细胞活化的影响。
❖ THP-1/U937分化检测：监测化合物诱导单核细胞向巨噬细胞分化的能力。
❖ NF-κB报告基因检测：基于NF-κB信号通路的报告基因系统，高效评估药物对炎症信号通路的调控。
❖ ADCP报告基因检测：利用报告基因细胞系，高通量评估抗体药物的ADCP活性。

先进的多维度检测技术平台

美迪西免疫检测平台配备国际领先的分析设备，为各类免疫学检测提供坚实的技术支撑：
流式细胞术平台
配备BD、Bio-Rad等品牌的高端流式细胞检测仪，最新引进的BD FACSymphony A5流式细胞分析仪配置五激光30参数，可同时启用多达28种颜色。流式细胞术几乎可应用于药物发现的各个阶段——从靶点鉴定、先导化合物筛选到大分子药物、ADC和疫苗开发。当前的高通量流式系统已能在一天内对数百个样本进行自动化多参数分析。
细胞因子检测平台
涵盖MSD电化学发光检测仪（MESO Sector S600）、Luminex液相芯片系统（Bio-Plex 200）、流式CBA及ELISA等多种检测平台。支持从单因子ELISA到40+因子多重检测的各类需求。
NanoString nCounter Pro系统
采用非扩增、高灵敏、快速检测方法，通过条形码探针直接检测临床前及临床样本中的单个mRNA转录本。
qFACS绝对定量分析
支持细胞表面抗原分子拷贝数（ABC, Antibody Binding Capacity）的绝对定量测定，为药代/药效学研究提供精准的靶点表达水平数据。
绝对细胞计数
基于微球法的精准计数，支持PBMC、细胞系等各类样本中特定细胞亚群的绝对定量。

合规性的质量体系与IND申报支持

美迪西拥有符合NMPA、FDA、OECD GLP标准及AAALAC认证的研究体系，所有检测数据均可直接用于IND申报。平台配备专业团队提供数据解读和实验优化建议。截至目前，美迪西已累计助力650+件IND获批临床，18件创新药成功出海，在免疫肿瘤药物研发领域系统性地建立了700种肿瘤模型。
美迪西IND申报服务

赋能创新，从每一个免疫学检测开始

无论是小分子免疫调节剂、大分子抗体药物，还是CAR-T、TCR-T、CAR-NK、TIL等细胞治疗产品，美迪西免疫与炎症检测平台都能提供从方法开发、验证到样本检测的全流程服务。平台支持个性化实验设计，满足肿瘤免疫、自身免疫性疾病、感染性疾病及疫苗研发等多领域需求。美迪西生物部以扎实的检测数据，为每一个创新分子的临床转化保驾护航！

免疫与炎症检测