腺病毒构建服务

一、技术简介：

重组腺病毒（Adenovirus）是一种高效且可靠的病毒表达系统，可用于在哺乳动物细胞中实现目的蛋白或shRNA的瞬时高水平表达。

其具备以下优点：
1. 宿主范围广：腺病毒可感染多种哺乳动物细胞类型，不仅可感染几乎所有人源细胞，还可感染大鼠、小鼠、兔、猪、羊、猴及鸡等多种物种来源的细胞。
2. 不依赖细胞周期：腺病毒感染不依赖细胞周期，既可感染增殖细胞，也可感染非增殖细胞。
3. 高效瞬时表达：外源基因表达水平高，且不整合入宿主基因组。
4. 病毒滴度高：适用于体内外实验研究。
 
本系统以Ad5血清型E1/E3缺失型腺病毒DNA为骨架，对克隆、包装及扩增等关键步骤进行了系统优化，从而实现更高的克隆阳性率、更稳定的包装过程及更高的病毒滴度。所制备的重组腺病毒已成功应用于细胞凋亡检测、染色质免疫沉淀（ChIP）、RT-PCR及免疫共沉淀（Co-IP）等实验。

二、实验步骤及周期：

1. 将目的基因插入腺病毒重组穿梭质粒中，实验周期为7个工作日， 如要求对载体的特定部件有所要求而需进行特殊改造，则此步实验路线及实验周期另行规定。
2. 将目的基因转移至腺病毒骨架中，实验周期为7个工作日。
3. 将确定正确的重组腺病毒质粒在293A细胞进行包装，时间约为20个工作日。
4. 腺病毒扩增和CsCl纯化，实验周期为7个工作日。
5. 对包装出的重组病毒进行质检。
质检包括对终产品病毒基因进行PCR和Western blot（WB）以确认目的基因的存在，实验周期为5个工作日。
 

三、服务承诺：

1. 提供的病毒量为1ml滴度>10¹⁰VP/ml，如需更多量的病毒请具体再商洽。
2. 提供穿梭质粒，重组腺病毒质粒及相关酶切鉴定电泳图，测序报告、终产物PCR或WB鉴定的实验报告。
3. 为了确保服务质量，合同周期为在实验周期的基础上加10个工作日。
 

四、应用实例：

Fig1:Infection efficiency of Ad-Fos in CGNs. DIV5 CGNs were infected with Ad-Fos at MOI of 100. Thirty six hours after infection phase-contrast light and fluorescent micrographs of the infected cells were visualized. The cells infected with Ad-Fos were fixed and were stained with a Flag-specific M2 antibody or without a primary antibody (-1°). Infection efficiency of adenovirus is about 80%.