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美迪西免疫学检测技术分析服务

作者:   上传日期:2016-05-11  阅读次数:

免疫学检测技术分析服务

›  免疫印迹
›  免疫共沉淀
›  ELISA
›  免疫组化
›  免疫荧光

美迪西以抗体平台为核心建立了一系列相关的后续免疫学检测平台,有ELISA,,WesternBlot等。
ELISA检测的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。产物的量与标本中受检物质的量直接相关,根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,间接地放大了免疫反应的结果,使测定方法达到很高的敏感度。 ELISA可用于测定抗原,也可用于测定抗体。

Western Blot是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法,用于检测经电泳或斑点杂交后固定于膜上的蛋白质的检测。特异、稳定的液态酶标抗体和相应的底 物,保证了快速、准确的检测;而避免了放射性物质的使用,现已成为蛋白分析的一种常规技术,对蛋白进行定性和半定量分析。

免疫检测技术


免疫学检测技术

一、抗原抗体反应
二、淋巴细胞的检测技术
三、免疫学常用的分子生物学技术

1、抗原抗体反应

抗原抗体反应的特点:特异性、可逆性、阶段性、可见现象;
抗原-抗体反应的分类:沉淀反应、凝集反应、免疫标记技术;
其中免疫标记技术是指用荧光素、酶及放射性同位素示踪物质标记抗原(或抗体)进行抗原抗体反应,通过示踪物质来检测未知抗原或抗体的一种方法。该方法可提高灵敏度。对抗原或抗体进行定性或定量及定位。

2、淋巴细胞的功能测定技术

(一)淋巴细胞的分离:
  ①外周血单个核细胞分离
  ②淋巴细胞亚群的分离及鉴定(表面标志选择性、纯化淋巴细胞亚群)

(二)淋巴细胞的功能测定技术
体外法:
    淋巴细胞增殖实试验
    细胞毒试验
    酶联免疫斑点法(enzyme-linkedimmunospot, ELISPOT)
体内法: 
①OT试验(细胞免疫)
②细胞因子检测: 机体的免疫细胞(如淋巴细胞、单核巨噬细胞)及非免疫细胞能产生不同种类的细胞因子,它们在免疫应答中起调控作用。细胞因子检测是判断机体免疫功能的重要指标,对某些疾病的诊断、病程观察、预后判断等是十分必要的。
检测方法:
a.生物学活性检测(Bioassay):依赖细胞株增殖法/靶细胞杀伤法/细胞病变抑制法/细胞因子诱导产物分析法
b.免疫学检测法:因为细胞因子具有抗原性,所以可以应用抗原-抗体反应来定量检测;ELISA:应用细胞因子的单克隆抗体和多克隆抗体;ELISPOT:Enzyme-linked immunospot assay,酶联免疫斑点试验;流式细胞仪
c.分子生物学检测法:应用细胞因子的探针进行检测
d.生物芯片检测

3、免疫学常用的分子生物学方法

①免疫印迹:高分辩率的凝胶电流与免疫化学分析技术相结合杂交技术,具有凝胶电流分析的容量大高分辨率和免疫化学分析的敏感度高、特异性强等优点。免疫印迹技术用来检测蛋白质特性、表达及分布的最常用的方法。

②免疫PCR:抗原与抗体反应与 PCR 技术相结合的一种新技术,原理同 ELISA,不同的是 PCR 的放大系统取代了酶标记的放大效应,此方法可测量微量抗原或抗体。


免疫检测技术的应用

免疫检测技术以广泛应用于生物科学的各个领域。
1.免疫疾病诊断
用免疫血清学方法对人和动物传染病、寄生虫病、肿瘤、自身免疫病和变态反应疾病进行诊断,是免疫技术最突出的应用。尤其是酶标抗体技术,已成为多种传染病的常规诊断方法,如已有的人各型肝炎、猪瘟等 ELISA 试剂盒,它们简便、快速,又具有高度的敏感性和可重复性。

2.动物植物生理活动研究
动植物中存在一些如激素、维生素等活性物质,它们在体内含量极微少,但在调节机体的生理活动中起重要作用,因此通过分析测定这些生物活性物质的含量及变化来研究机体的各种生理功能(如生长生殖等)。由于这些物质含量极低,用常规化验方法难以准确测出。目前放射免疫测定和酶免技术已能精确测出 ng(10 -9 g) 及 pg(10 -12 g) 水平的物质,它们已成为测定动物、植物、昆虫中微量激素及其它活性物质,研究动物、植物生理和生物防治的重要手段。

3.物种及微生物鉴定
各种生物之间的差异都可表现在抗原性不同,物种种源越远,抗原性差异越大,因此可用区分抗原性的血清学反应进行物种鉴定、物种的分类等工作。血清学反应在细菌、病原菌等微生物鉴定和血清型及亚型的分析方面已得到广泛应用。但对动物种源,植物和昆虫分类方面还是一个新的领域。

4.动物、植物性状的免疫标记
通过分析动物、植物的一些优良性状(如高产、优质、抗逆性等)的特异性抗原,然后用血清学方法进行标记选择育种,这是一个很有前途的方向,它比分子遗传学标记选择育种简便。

5.免疫增强药物和疫苗的研究
疫苗研究中需用血清学反应和细胞免疫技术测定免疫的效果。在研究一些免疫增强药物,尤其研究肿瘤药物时,需用细胞免疫技术分析测定它们对机体细胞免疫功能的增强作用。因为细胞免疫是机体抗肿瘤、抗病毒的一个重要机制。

6.发病机理研究
传染病的病原从机体特定部位感染,并在特定组织细胞内增殖,引起发病。一荧光抗体感染或免疫酶组化染色,可在细胞水平上确定发病等病原微生物的感染细胞,还可用于研究自身免疫病和变态反应性疾病的发病机理,如免疫复合物的沉积部位的分析。

7.分子生物学研究

在基因工程的分离、克隆的筛选,表达产物的定性与定量分析,表达产物的纯化等均涉及到免疫技术。如通常用免疫沉淀方法分离 mRNA 基因,酶标抗体核酸探针(地高辛核酸探针)检测筛选克隆,免疫转印技术分析表达产物的分子量、 ELISA 或 RIA 分析表达量、免疫亲和层析纯化表达产物,免疫方法分析表达产物的性质如免疫原性。免疫技术已是分子生物学研究中必不可少的工具。


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