原位杂交技术的分类有哪些？

原位杂交（In Situ Hybridization，ISH）属于分子杂交的一种，是一种将标记探针直接与组织或细胞中的待测核酸杂交，并结合免疫细胞化学的原理使用合适的检测系统，从而对目标核酸序列进行精确定量定位的方法。

原位杂交技术（In Situ Hybridization)

原位杂交技术是在研究 DNA 分子复制与核酸互补配对原理基础上发展起来的一种分子生物学技术。其基本原理为两条互补核苷酸单链在适宜条件下可通过氢键结合形成DNA-DNA、DNA-RNA或RNA-RNA双键分子的特点。将带有标记的（放射性同位素如³H、³⁵S、³²P、荧光素生物素、地高辛等非放射性物质)DAN或RNA片段作为核酸探针,与组织切片或细胞内待测核酸(RNA或DNA）片段进行杂交，然后可用放射自显影等方法予以显示，在光镜或电镜下观察目的mRNA或DAN的存在与定位。

利用原位杂交术，可在原位研究细胞合成某种多肽或蛋白质的基因表达。 此方法有很高的敏感性和特异性，可进一步从分子水平来探讨细胞的功能表达及其调节机制。已成为当今细胞生物学和分子生物学研究的重要手段。

发展进程：

1969年，Pardue和Gall最先研发了此项技术，当时可用的唯一标记物是放射性同位素，放射自显影技术显然成为探针序列检测的方法。但放射性标记探针由于安全要求措施严格、有效期短、显影时间长及放射衰变引发的低分辨率等因素，原位杂交技术的发展和应用大受限制。随着非放射性标记探针的出现，上述问题得到解决，原位杂交技术逐渐得到广泛应用。

方法：

非放射性原位杂交技术根据标记探针的类型分为两种。直接检测法（以荧光素直接标记探针）和间接检测法（以地高辛或生物素标记的核苷酸作为底物，通过PCR合成标记探针。）

原位杂交技术分类

（1）基因组原位杂交技术：主要是利用物种之间DNA同源性的差异，用另一物种的基因组DNA以适当的浓度作封阻，在靶染色体上进行原位杂交。

（2）荧光原位杂交技术：利用荧光标记的核酸片段为探针，与染色体上或DNA显微切片上的特异fl-N：~行杂交，通过荧光检测系统(荧光显微镜)检测信号DNA序列在染色体或DNA显微切片上的目的DNA序列，进而确定其杂交位点。

（3）多彩色荧光原位杂交技术：是在荧光原位杂交技术的基础上发展起来的一种新技术，它用几种不同颜色的荧光素单独或混合标记的探针进行原位杂交，能同时检测多个靶位，各靶位在荧光显微镜下和照片上的颜色不同，呈现多种色彩，因而被称为多彩色荧光原位杂交。

（4）原位PCR：是常规的原位杂交技术与PCR技术的有机结合，即通过PCR技术对靶核酸序列在染色体上或组织细胞内进行原位扩增使其拷贝数增加，然后通过原位杂交技术进行检测，从而对靶核酸序列进行定性、定位和定量分析。原位PCR技术大大提高了原位杂交技术的灵敏度和专一性，可用于低拷贝甚至单拷贝的基因定位，为原位杂交技术的发展提供了更广阔的发展前景。