腺病毒构建服务

一、技术简介：

重组腺病毒（Adenovirus）是一种目前最高效可靠的重组病毒表达系统之一，可用于在哺乳细胞中瞬时及高水平地表达shRNA或目的蛋白质。
其具备以下优点：
1. 宿主范围广：腺病毒除可感染一系列哺乳动物细胞,除可感染几乎所有人的细胞类型外，还可感染包括大鼠、小鼠、兔、猪、羊、猴、鸡等物种。
2. 因腺病毒的感染不依赖细胞周期，故其既可以感染增殖细胞也可以感染非增殖细胞。
3. 瞬时高效表达，不整合到基因组中。
4. 病毒滴度高，可用于动物水平的实验。
 
本系统是以Ad5血清型E1/E3缺陷型腺病毒DNA为骨架、在克隆、包装、扩增等各部条件做了改进和优化，达到了克隆阳性率更高，质量更可靠，包装稳定，出毒迅速，滴度高等效果。所包装的腺病毒已成功应用于凋亡检测、染色质免疫沉淀（ChIP）、RT-PCR、Co-IP等科研实验。
 

二、实验步骤及周期：

1. 将目的基因插入腺病毒重穿梭质粒中，实验周期为7个工作日， 如要求对载体的特定部件有所要求而需进行特殊改造，则此步实验路线及实验周期另行规定。
2. 将目的基因转移至腺病毒骨架中，实验周期为7个工作日。
3. 将确定正确的重组腺病毒质粒在293A细胞进行包装，时间约为20个工作日。
4. 腺病毒扩增和CsCl纯化，实验周期为7个工作日。
5. 对包装出的重组病毒进行质检。
质检包括对终产品病毒基因进行PCR和WB以确认目的基因的存在，实验周期为5个工作日。
 

三、服务承诺：

1. 提供的病毒量为1ml滴度>1010VP/ml，如需更多量的病毒请具体再商洽。
2. 提供穿梭质粒，重组腺病毒质粒及相关酶切鉴定电泳图，测序报告、终产物PCR或WB鉴定的实验报告。
3. 为了确保服务质量，合同周期为在实验周期的基础上加10个工作日。
 

四、应用实例：

 
Fig1:Infection efficiency of Ad-Fos in CGNs. DIV5 CGNs were infected with Ad-Fos at MOI of 100. Thirty six hours after infection phase-contrast light and fluorescent micrographs of the infected cells were visualized. The cells infected with Ad-Fos were fixed and were stained with a Flag-specific M2 antibody or without a primary antibody (-1°). Infection efficiency of adenovirus is about 80%.