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美迪西酶联免疫吸附试验技术服务

作者:   上传日期:2016-03-30  阅读次数:

酶联免疫吸附试验(ELISA)技术服务:各类酶联免疫吸附试验的检测、酶联斑点图像的分析、克隆形成自动分析、溶血斑点实验、病毒斑等。

酶联免疫吸附试验


免疫酶技术(immunoenzymatic technique)  最早应用的免疫酶技术是免疫酶组织化学染色,即用标记的抗体与标本中的抗原发生特异性结合,当加入酶的底物时,在酶的作用下经一系列生化反应产生有色物质,借助光镜作出定位判断。目前,应用最广泛的是酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)。该法特异性强,敏感性高,既可检测抗体,又能测定可溶性抗原。ELISA常采用的酶为辣根过氧化物酶(hosradish peroxidase,HRP),其底物是二氨基苯胺(DAB),底物被分解则呈棕褐色,可目测或借助酶标仪比色。

酶联免疫吸附测定enzyme linked immunosorbent assay(简写ELISA)指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上,利用抗原抗体结合专一性进行免疫反应的定性和定量检测方法。

ELISA是将抗原与抗体免疫反应的特异性,同酶的高效催化作用相结合,而建立的一种非放射性标记免疫检测技术。可以定性或定量检测体液中的半抗原、抗原和抗体。该技术用化学方法使酶与抗原或抗体結合生成酶标记物,或通过免疫方法将酶与抗酶抗体相结合生成酶抗体结合物。

酶联免疫吸附试验(Elisa)的基本原理有三条:
(1)抗原或抗体能以物理性地吸附于固相载体表面,可能是蛋白和聚苯乙烯表面间的疏水性部分相互吸附,并保持其免疫学活性;
(2)抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结合物,而此种酶结合物仍能保持其免疫学和酶学活性;
(3)酶结合物与相应抗原或抗体结合后,可根据加入第五的颜色反应来判定是否有免疫反应的存在,而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的,因此,可以按底物显色的程度显示试验结果。
酶联免疫分析用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接,然后通过酶与底物产生颜色反应,用于定量测定。测定的对象可以是抗体也可以是抗原。

酶联免疫分析测定方法:主要研究方法有间接法(常用于检测抗体)/双抗体夹心法(常用于检测抗原)/抗原竞争法(既可检测抗原,亦可检测抗体)。
1、测定抗体的间接法
a.将抗原吸附于固相载体表面,洗涤除去未吸附的抗原。
b.加抗体,保温,形成抗原—抗体复合物洗涤除去其余的杂蛋白。
c.加酵标抗抗体,保温,洗涤。
d.加入底物,测定底物的降解量二抗体量。
2、测定抗原的双抗体夹心法
首先将特异抗体的免疫球蛋白吸附在反应板凹孔内,洗涤除去未吸附的抗体,加入含有抗原的待测溶液,保温形成抗原—抗体复合物,洗涤除去杂蛋白后再加上述特异抗体,由于抗原是多价的并未被抗体饱和,经保温则可形成抗体—抗原—抗体复合物,洗涤后加酶标抗抗体,保温洗涤后加底物呈色,中止酶活性,比色测定抗原量。
3、测定抗原的竞争法

将含有特异抗体的免疫球蛋白吸附在两份相同的载体(甲)和(乙)中,然后在(甲)中加入酶标抗原和待测抗原,(乙)中只加酶标抗原,其浓度相同于(甲)中加入的酶标抗原的浓度,保温洗涤后加底物呈色。待测液中未知抗原量愈多,则酶标抗原被结合的量就愈少,有色产物就愈少,以此便可测出未知抗原的量,即等于(甲)与(乙)底物降解量的差值。

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以上内容是关于酶联免疫吸附试验,酶联免疫吸附测定的介绍,来源于美迪西官网。


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